1、PCR實驗室平面布局：


在原則上，pcr試驗實驗室分為四個獨立的工作區：試劑儲存和制備區、試樣制備區、放大反應混合物配制和放大區、放大產物分析區。為了避免交叉污染，進入每個工作區必須嚴格遵循出入的方向，即只從試劑儲存和制備區→試樣制備區→放大反應混合物配方和放大區→放大產物分析區。


2、個實驗室空調通風系統的設計與壓力控制


pcr實驗室沒有嚴格的凈化要求，但為了避免各個實驗區之間交叉污染的可能性，建議采用全氣流組織形式。同時，要嚴格控制空氣的輸送和排放比例，保證各試驗區的壓力要求。


2.1pcr試劑儲存和制備區


實驗區的主要操作是制備貯存試劑、分離試劑和制備主要反應混合物。用于樣品生產的試劑和材料必須直接運到該地區，不得通過其他地區。試劑的原料必須存放在該區域，所需的存儲試劑必須在該區域制備。


這一地區對氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。


2.2pcr試樣準備區


該區域主要用于樣品的保存、核酸(rna，dna)的提取和儲存、擴增反應管的加入以及dna的合成。


該區域的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域的正壓力，以避免從鄰近區域進入該區域的氣溶膠污染。此外，由于在取樣過程中可能發生氣溶膠污染，應避免不必要的氣體在該區域周圍行走。


2.3放大混合物配方和增強區


該區域主要是作為dna放大操作。此外，在這一地區還可以添加準備好的dna模板(來自樣品制備區)和將主要反應混合物(來自試劑儲存和制備區)制備成反應混合物。


該區域的壓力梯度要求是相對于鄰近區域的負壓，以防止氣溶膠泄漏出該區域。為了避免氣溶膠污染，應盡量減少該地區不必要的移動。個別操作，如取樣，應在超清晰表中進行。


2.4放大產品分析領域


該區域主要用于測定放大后的碎片。


這個地區是添加劑污染的主要來源。因此，這一區域的壓力梯度必須是相對于鄰近區域的負壓，以防止放大產物從這一區域擴散到其他區域。


PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域：試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染，進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區→標本制備區→擴增反應混合物配制和擴增區→擴增產物分析區。


2實驗室空調通風系統設計及壓力控制


PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區。


2、壓力要求。


2.1PCR試劑貯存和準備區


該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區，不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的貯存試劑。


對與氣流壓力的控制，本區并沒有嚴格的要求。


2.2PCR標本制備區


該區域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。


本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的走動。


2.3擴增反應混合物配制和擴增區


該區域主要進行的操作為DNA擴增。此外，已制備的DNA模板(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。


本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。


2.4擴增產物分析區


該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。


本區是最主要的擴增產物污染來源，因此對本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。


3、預防和控制污染


pcr實驗室設計的中心問題是如何避免污染。在實踐中，常見的污染類型有：放大產物的污染天然基因組dna的污染試劑的污染和標本之間的污染。一旦污染發生，實驗必須停止，直到找到污染源，實驗結果必須失效，實驗必須重新進行。因此，在污染發生后在實驗室周圍尋找污染源不僅費時費力，而且浪費人力物力。因此，為了避免污染，預防應該是第一步，而不是消除。


3.1嚴格劃分工作領域


(一)各試驗區設置合理


(2)每個實驗區必須有明顯的標記(如醒目的房標或不同的地色等)，以避免不同實驗區的設備項目和試劑混淆。


3.2合理的系統設置


(一)合理設置空調通風系統，盡量采用全交付式空調系統


(2)嚴格的氣流壓力控制，以確保不同試驗區的不同壓力要求。


3.3規范的操作


(一)擴增實驗室技術人員必須接受誘導培訓，并通過培訓，方可進行臨床基因擴增試驗


(2)在實驗操作過程中，操作人員必須戴上手套并經常更換。另外，操作中使用一次性帽也是防止污染的有效措施


(三)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后，該地區必須立即清理。除常規消毒液擦拭表面或紫外線燈照射消毒外，部分實驗設備還應進行高壓消毒處理。


3.4嚴格管理


(一)嚴格控制人員進出實驗室。與實驗無關的人不得隨意進出實驗室。在條件允許的情況下，必須設置獨立的通道和門，進出整個試驗區


(2)盡量減少在實驗區不必要的移動的可能性，以減少交叉污染。


(三)放大產物分析區是放大產物的主要污染源。廢液不能傾倒在實驗室，必須用消毒劑消毒，放在指定的位置處理。用過的吸頭和其他一次性材料，也應在浸泡后統一消毒焚化處理


(四)放大產品分析領域可以使用某些誘變和有毒物質。應特別注意實驗室人員的安全保護。


3.5適當的實驗室設施


完整的實驗室設施是保證實驗工作的必要條件。設備和儀器應根據每個實驗室實驗的內容配備，如超清潔工作臺、離心機和采樣器。


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