一、腺病毒服務簡介腺病毒(adenovirus)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒。它的宿主范圍很廣，既可感染分裂細胞，又可感染非分裂細胞。腺病毒在感染宿主細胞時，病毒基因組及其攜帶的外源基因獨立于宿主基因組外游離表達，因此無插入突變性，安全性更高。腺病毒載體的外源基因裝載量較大、表達速度快，產生的病毒滴度高，因此已經(jīng)被廣泛應用于基礎研究和基因治療中。輝駿生物使用的腺病毒包裝系統(tǒng)包括一個穿梭質粒和一個輔助質粒，攜帶外源基因的穿梭質粒與含有腺病毒基因組(E1/E3缺失)的輔助質粒共轉染包裝細胞后，利用Cre-loxP重組酶切割系統(tǒng)，即可產生攜帶外源基因的非復制型重組腺病毒，重組效率大大提高。包裝出的腺病毒液可直接感染宿主細胞，介導外源基因的瞬時、高效表達。輝駿生物的腺病毒載體包含多種熒光標簽(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標簽和多種啟動子，可充分滿足客戶不同實驗設計的要求。 二、腺病毒表達系統(tǒng)的特點1>病毒基因不整合到染色體中，而是游離于宿主細胞染色體外瞬時表達，無插入致突變性；2>有廣泛的宿主范圍，對分裂期和非分裂期細胞均有感染作用；3>不需要轉染試劑，操作簡便，轉染效率極高；4>外源基因裝載容量大，可插入高達8kb的外源基因片段；5>能同時表達多個基因，可以將含有兩個基因的雙表達盒插入腺病毒轉移載體中，或者用不同的重組病毒共轉染目的細胞株來分別表達一個蛋白；6>病毒感染后，外源蛋白表達快，實驗周期短。 三、腺病毒技術整體流程A.腺病毒載體的構建：根據(jù)客戶的不同需要，將目的基因片段連接至腺病毒穿梭載體；B.腺病毒包裝：腺病毒穿梭質粒與輔助質粒一起轉染293細胞進行包裝；收集富含腺病毒顆粒的細胞上清液，濃縮后進行滴度測試，得到滴度≥1×10⁸ e8pfu/ml的腺病毒液；                                                                圖1腺病毒技術服務整體流程四、腺病毒穿梭載體元件       在腺病毒的包裝系統(tǒng)中，腺病毒基因組質粒負責攜帶腺病毒的大部分骨架元件，穿梭質粒負責攜帶外源基因表達盒。兩者共轉染包裝細胞后發(fā)生同源重組，攜帶外源基因的病毒基因組被包裝，產生重組的腺病毒顆粒。輝駿生物提供的穿梭質粒可以插入多種不同的外源基因表達盒，具體元件如下所示，除此之外，客戶還可以根據(jù)需要更換啟動子、熒光基因或抗性基因。                                                                                          圖2腺病毒載體元件示意圖 五、腺病毒技術服務項目表1 腺病毒服務項目及內容分類服務編號項目名稱客戶提供服務描述基因過表達腺病毒服務FG201基因過表達腺病毒載體構建目標基因的模板構建載體FG202基因過表達腺病毒包裝套餐目標基因的模板(1)構建載體(2)腺病毒包裝microRNA腺病毒服務FG211microRNA過表達載體構建microRNA前體或初始產物模板構建載體FG212microRNA過表達腺病毒包裝套餐microRNA前體或初始產物模板(1)構建載體(2)腺病毒包裝RNAi腺病毒服務FG221RNAi腺病毒載體構建目標基因登錄號或序列(1)設計并合成1條干擾序列(2)構建載體FG222RNAi腺病毒包裝套餐A目標基因登錄號或序列(1)設計并合成3條干擾序列(保證至少有1個靶序列的干擾效率大于70%)(2)分別構建3條載體(3)分別進行3次腺病毒包裝FG223RNAi腺病毒包裝套餐B設計好的有效靶點序列(1)構建載體(2)腺病毒包裝注: 可提供多條干擾序列特別提醒：（1）基因過表達腺病毒服務適用于目標基因長度為4000bp以下的片段，4000bp以上的請具體咨詢；（2）我公司亦可進行基因釣取和WB檢測服務，但費用不包含在總套餐之內，需根據(jù)實際情況收費；（3）客戶如對所需病毒量及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×10¹¹~1×10¹³ vp之間，規(guī)格為1mL；（4）若實驗材料為原代細胞和需要特殊培養(yǎng)的細胞，請具體咨詢；（5）客戶亦可根據(jù)特殊要求進行腺病毒產品定制服務。 六、實驗結果提交實驗結束后，我公司會提交完整的實驗結果，包括：1.客戶定制的相應載體或病毒液；2.腺病毒液滴度測定報告單；3.腺病毒載體的測序結果和峰圖、引物序列、載體圖譜；4.全部實驗圖片；5.詳細實驗報告。 七、實驗周期及收費標準：咨詢本公司