1.      原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的隱性孔雀石綠隱性結晶紫和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭孔隱性雀石綠抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物隱性孔雀石綠隱性結晶紫的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應隱性孔雀石綠隱性結晶紫的含量。
 
2.    試劑盒組成
（1）       96孔酶標板：1塊。
（2）       標準品液:（1.0ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.4ppb、1.6ppb、6.4ppb、25.6ppb。
（3）       酶標記物：    1瓶（12ml）。
（4）       抗體工作液：  1瓶（7ml）。
（5）       底物緩沖液：  1瓶（7ml）。
（6）       底物液：      1瓶（7ml）。
（7）       終止液：      1瓶（7ml）。
（8）       20倍濃縮洗液：（50ml）加蒸餾水稀釋到1000ml。
（9）       提取液A
（10）   提取液B
 
3.      需要但試劑盒中不提供的器材和試劑
（1）設備
…微孔板酶標儀(450nm)
…均質器
…振蕩器
…離心機
…各種量程的微量移液器
（2）試劑
…蒸餾水
…環已烷
 
4.      注意事項
（1）終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
（2）不要使用已過有效日期的隱性孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。
（3）0標準液的A450nm<0.6時，表示試劑可能變質，請勿使用。
（4）顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。
 
5.      儲存條件
（1）       2-8℃保存，切勿冷凍。
（2）       將不用的酶標板放進原袋中重新密封。
（3）       酶標記物和顯色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 
6.      樣品處理
（1）       魚/蝦樣品的準備（稀釋倍數2）
A）魚蝦去皮取肉，用勻漿器均質樣品；
B）稱取1.0g均質好的樣品，放入15mL離心管中,加入0.5mL的提取液A,再加入1.5mL的提取液B，渦旋5-10分鐘；
C）3000rpm離心5分鐘，取上清，
D）取上清50μl進行實驗。
（2）       水質樣品（稀釋倍數1）
離心后取50μl作ELISA分析。
 
7.      免疫分析時試劑的準備
（1）       注意事項
a) 使用之前將所有試劑平衡至室溫。
b) 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
c) 在使用中不要讓微孔干燥。
d) EIA分析的重復性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
e)         在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
（2）濃縮洗滌液使用前應根據所需量進行20倍稀釋，即按1ml濃縮洗滌液加入19ml蒸餾水的比例進行稀釋。
 
8.      測定程序
（1）       將標